Попов Д. А., Овсеенко С. Т., Вострикова Т. Ю.
ФГБНУ "НЦ ССХ им. А.Н. Бакулева";
Цель:Сопоставить результаты прямой идентификации возбудителей бактериемий методом MALDI-TOF и традиционного бактериологического метода.
Материал и методы:
в исследование включена 101 положительная гемокультура. Инкубация осуществлялась по стандартному протоколу в уголь-содержащих и безугольных аэробных флаконах с помощью приборов BACTAlert 3D (bioMerieux, Франция) и BACTEC 9050 (США). При выявлении положительных гемокультур производили их высев на плотные питательные среды с последующей идентификацией чистых культур с помощью автоматического микробиологического анализатора Vitek 2 compact (Biomerieux, Франция). Параллельно с данным традиционным методом, содержимое «проросших» флаконов после соответствующей пробоподготовки исследовали методом MALDI-TOF – масс-спектрометрии. В ходе исследования образец в объеме 1 мл помещали в микропробирку, добавляли 200 мкл 5% водного раствора сапонина, перемешивали и центрифугировали 1 мин при 12000 g, супернатант отбрасывали. Осадок промывали сначала 1 мл фосфатно-солевого буфера, затем 1 мл 70% этанола. После удаления супернатанта к осадку добавляли сначала 20 мкл муравьиной кислоты, затем 20 мкл ацетонитрила, перемешивали и центрифугировали 2 мин при 12100 g, далее 1 мкл супернатанта наносили на слайд вместе с раствором матрикса в соотношении 1:1. Масс-спектры регистрировали на MALDI-TOF – масс-спектрометре Vitek MS (bioMerieux, Франция).
Результаты:
в исследованных гемокультурах традиционным методом выделены 13 видов микроорганизмов: Klebsiella pneumoniae (n=28), Klebsiella oxytoca (n=3), Acinetobacter baumannii (n=3), Pseudomonas aeruginosa (n=4), Pseudomonas putida (n=1), Serratia marcescens (n=7), Enterobacter cloacae (n=3), Stenotrophomonas maltophilia (n=1), Staphylococcus haemolyticus (n=12), Staphylococcus epidermidis (n=20), Staphylococcus hominis (n=9), Enterococcus faecalis (n=8), Enterococcus faecium (n=2). При анализе тех же гемокультур по масс-спектру были идентифицированы 79/101 (78,2%): Klebsiella pneumoniae (n=26), Klebsiella oxytoca (n=2), Acinetobacter baumanii (n=3), Pseudomonas aeruginosa (n=4), Burkholderia vietnaviensis (n=1), Serratia marcescens (n=6), Enterobacter cloacae (n=3), Stenotrophomonas maltophilia (n=1), Staphylococcus haemolyticus (n=9), Staphylococcus epidermidis (n=10), Staphylococcus hominis (n=8), Enterococcus faecalis (n=5), Enterococcus faecium (n=1). Частота успешной идентификации гемокультур составила 78,2%. Показана возможность сокращения времени видовой идентификации до 1,5 часов (включая подготовку образца) против 1,5-2 суток при традиционном подходе.
Выводы:
метод MALDI-TOF – масс-спектрометрии позволяет ускорить видовую идентификацию микроорганизмов в положительной гемокультуре до 1,5 часов, что способствует более раннему назначению эффективных режимов антибиотикотерапии.
Комментарии посетителей