Попов Д. А., Надточей Е. А., Вострикова Т. Ю., Овсеенко С. Т.
ФГБУ "НЦ ССХ им. А.Н. Бакулева" Минздрава России;
Цель: Оценить результаты ускоренных способов идентификации положительных гемокультур с применением метода MALDI-ToF MS.
Материал и методы: В исследование включено 360 положительных гемокультур от 187 кардиохирургических пациентов (162 взрослых и 25 детей) в возрасте от 1 нед. до 82 лет. В параллели с рутинным методом (суточное культивирование с последующим MALDI-ToF MS – анализом, Vitek MS (bioMérieux, Франция) исследованы характеристики двух ускоренных методик идентификации гемокультур. Методом сокращенного субкультивирования первичной гемокультуры исследовано 300 образцов (284 монокультуры). Гемокультуры высевали на подогретый до 37°С кровяной агар с последующей инкубацией при 37°С (максимально – до 6 ч). При выявлении визуально определяемого роста выполняли идентификацию микроорганизмов с помощью MALDI-ToF MS. Методом прямой идентификации возбудителей бактериемии (минуя этап высева на плотные питательные среды) исследовано 211 образцов (201 монокультура). Пробоподготовка образцов из «положительных» флаконов включала в себя ряд последовательных этапов (лизис-центрифугирование, экстракция белков, фильтрация и др.), полученный экстракт подвергали анализу с помощью MALDI-TоF MS.
Результаты: После сокращенного субкультивирования на кровяном агаре монокомпонентных гемокультур методом MALDI-ToF MS было идентифицировано 259/284 (91,2%) микроорганизмов. Доля успешной идентификации грамотрицательных, грамположительных бактерий и грибов рода Candida составила 97%, 94,5% и 43,5% соответственно. Среднее время субкультивирования грамотрицательных, грамположительных бактерий и грибов рода Candida составило 2,7 ч, 3,9 ч и 5 ч соответственно. Результаты успешной идентификации микроорганизмов во всех случаях полностью совпадали с результатами, полученными рутинным методом. При прямой идентификации монокомпонентных гемокультур корректно идентифицировано до вида 163/201 (81,1%) образцов, при этом доля успешных идентификаций грамотрицательных, грамположительных микроорганизмов и грибов составила 93,9%, 75,2% и 40% соответственно. Временны́е затраты на проведение масс-спектрометрического анализа, включая пробоподготовку, составили не более 1 ч. Ретроспективно проанализирован 151 случай, когда идентификация проводилась одновременно двумя ускоренными методами. При этом суммарная доля успешных идентификаций монокомпонентных гемокультур (n=141) достигла 95%: 98,4% грамотрицательных бактерий, 96% грамположительных кокков, и 50% грибов рода Candida (индекс каппы Коэна при сравнении с рутинным методом – 0,92).
Вывод: Применение методов ускоренной идентификации положительных гемокультур с помощью MALDI-ToF MS позволяет быстро и надежно идентифицировать возбудителей бактериемий, что при использовании данных локального микробиологического мониторинга может способствовать раннему началу адекватной антибиотикотерапии.
Комментарии посетителей