Применение метода матричной лазерной десорбционной ионизационной времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS) для прямой идентификации положительных гемокультур

Назад к программе

Попов Д. А., Овсеенко С. Т., Вострикова Т. Ю.

ФГБУ НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН;

Цель: Сопоставить результаты, полученные с помощью метода MALDI-TOF MS, с данными традиционного метода культивирования крови у кардиохирургических пациентов с бактериемией. Материалы и методы: инкубация гемокультур осуществлялась по стандартному протоколу в трех видах аэробных флаконов: уголь-содержащих BacT/ALERT FA, безугольных BacT/ALERT FA Plus и BACTEC BD с помощью приборов BACTAlert 3D (bioMerieux, Франция) и BACTEC 9050 (США). При выявлении положительной гемокультуры проводили ее идентификацию и исследовали чувствительность к антибиотикам на автоматическом анализаторе Vitek 2 compact (bioMerieux, Франция). Параллельно с традиционными методами, содержимое 23 «проросших» флаконов исследовали методом MALDI-TOF. Образец в объеме 5 мл помещали в пробирку с гелем, центрифугировали 10 мин (3000 об/мин), супернатант отбрасывали. Осадок на поверхности геля, содержащий клетки микроорганизмов, элюировали 1 мл дистиллированной воды, затем снова центрифугировали 15 мин (6000 об/мин), супернатант удаляли, 1 мкл образца наносили на спот вместе с раствором матрикса в соотношении 1:1. Масс-спектры регистрировали на MALDI-TOF масс-спектрометре Vitek MS (bioMerieux, Франция). Результаты: в 23 взятых в исследование гемокультурах традиционными методами выделены 8 видов микроорганизмов: Klebsiella pneumoniae (n=10), Acinetobacter baumanii (n=1), Serratia marcescens (n=1), Escherichia coli (n=1), Staphylococcus haemolyticus (n=5), Staphylococcus epidermidis (n=3), Enterococcus faecalis (n=1), Enterococcus faecium (n=1). При анализе тех же гемокультур по масс-спектру с помощью метода MALDI-TOF были идентифицированы 11/23 (48%) образцов с полным совпадением результатов идентификации с данными метода классической микробиологии: Klebsiella pneumoniae (n=7), Acinetobacter baumannii (n=1), Staphylococcus haemolyticus (n=2), Staphylococcus epidermidis (n=1). При этом время идентификации было снижено до 40 минут (включая подготовку образца) против 1,5-2 суток при традиционном подходе. Выводы: полученные предварительные результаты свидетельствуют о том, что с помощью метода MALDI-TOF имеется возможность значимого ускорения видовой идентификации микроорганизмов в положительной гемокультуре, что является важным аспектом оптимизации эмпирического назначения антибиотиков. Для увеличения «выхода» идентификации необходимо совершенствование пробоподготовки.

Комментарии посетителей

нет комментариев
Комментарии могут отправлять участники данного мероприятия или члены Ассоциации.